一、酶標(biāo)板的檢測(cè)操作步驟：

　　1．加樣品：將標(biāo)本稀釋液100ul（或2滴）加到包被板內(nèi)（預(yù)留陰陽性及空白對(duì)照2－5孔），將待檢血清用PBS或生理鹽水按1：20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。

　　2．加對(duì)照：加入陰性對(duì)照1－3孔，陽性對(duì)照1孔，各100ul對(duì)照血清?？瞻讓?duì)照1孔空置。

　　3．溫育：將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后，置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。

　　4．洗板：用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。

　?。?）手洗：將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出，將洗滌液注滿反應(yīng)孔，放置30秒鐘后用力甩去，如此重復(fù)5次后拍干。

　　（2）機(jī)洗：5次，每孔注入洗滌液200ul或注滿，停留30秒鐘后吸盡拍干。

　　5．加酶標(biāo)工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶標(biāo)工作液，置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后，洗板5次，洗板操作同步驟4。

　　6．顯色和終止反應(yīng)：將底物A、B液各50ul（或1滴）加到反應(yīng)孔內(nèi)，37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul（或1滴）混勻終止反應(yīng)。

　　二、酶標(biāo)板的檢測(cè)結(jié)果判定：

　　1．酶標(biāo)儀設(shè)定波長450nm，先用空白調(diào)零，然后測(cè)定各孔OD值；如果選用雙波長測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照孔。

　　2．當(dāng)陰性對(duì)照平均OD值小于0.08，陽性對(duì)照（pc）OD值大于0.30時(shí)，說明試劑盒有效且實(shí)驗(yàn)操作正確，否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗(yàn)。

　　3．臨界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋陰性對(duì)照平均（NC）OD值（當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時(shí)，按0.05計(jì)算；當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時(shí)按實(shí)際值計(jì)算）。

　　4．標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性，標(biāo)本OD值>臨界值為陽性。

　　酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值，其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無法結(jié)合；此外，其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。